Капиллярная кровь определение мочевины микрометод. Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом

Читайте также:
  1. CASE -технологии, как новые средства для проектирования ИС. CASE - пакет фирмы PLATINUM, его состав и назначение. Критерии оценки и выбора CASE - средств.
  2. I блок 9. Профессиональное становление личности. Условия эффективного профессионального самоопределения.
  3. II. Рабочие определения, используемые при анализе литературного произведения
  4. II. Состав, порядок определения баллов оценки качественных критериев и оценки эффективности на основе качественных критериев
  5. III. Состав, порядок определения баллов оценки и весовых коэффициентов количественных критериев и оценки эффективности на основе количественных критериев

Показатели азотистого обмена

Небелковый азот

Это преимущественно конечные продукты обмена простых и сложных белков.

Состав:

азот мочевины (50% от общего количества небелкового азота)

азот аминокислот (25%)

мочевая кислота (4%)

креатина (5%)

креатинина (2,5%)

аммиак и индикан (0,5%)

другие небелковые вещества, содержащих азот (нуклеотиды, нуклеозиды, глютатион, билирубин, уробилин, холин, гистамин и т.д.).

Ретенционная азотемия

Наступает в результате недостаточного выделения с мочой азотсодержащих продуктов при нормальном поступлении их в кровяное русло.

Почечная ретенционная азотемия - вследствие ослабления экскреторной функции почек. Развивается в основном за счет мочевины (90% небелкового азота приходится на азот мочевины, тогда как в норме – 50%). Встречается при гломерулонефрите, амилоидно-сморщенной почке, пиелонефрите, туберкулезе почек и др.

Внепочечная ретенционная - вследствие уменьшения почечного кровотока (тяжелая недостаточность кровообращения, снижение АД) или препятствия оттоку уже образовавшейся мочи. Встречается при профузных кровотечениях, травматическом шоке, при врожденных пороках сердца, опухолях мочевого пузыря, гиперторифии простаты.

Продукционная азотемия

Возникает при избыточном поступлении азотсодержащих веществ в кровь, как следствие усиленного распада тканевых белков. Функция почек при этом, как правило, не нарушена.

Встречается при кахексии, лейкозе, обширных ранениях, инфекциях, кишечной непроходимости и др.

Возможны азотемии смешанного характера!

МОЧЕВИНА

Конечный продукт обмена белков в организме. Наименее токсична по сравнению с остальными азотистыми веществами сыворотки (приблизительно в 18 раз).

Образуется в печени из аммиака.

Методы определения:

Ферментативные (уреазный): мочевина под действием уреазы разлагается на углекислый газ и аммиак → колориметрия с реактивом Несслера.

Неферментативные (диацетилмонооксимный): основан на способности мочевины взаимодействовать с диацетилмонооксимом → окрашенные продукты→ колориметрия.

Сухая химия – тест полоски, полуколичественно (анализ – Х).



Норма мочевины в крови 2,5-8,3 ммоль/л (20-40 мг/100 мл), в моче за сутки - 20-35 г (330-580 ммоль/л) мочевины.

Клиническое значение определения мочевины

Сдвиги в уровне мочевины крови зависят от соотношения процессов мочевинообразования и ее выведения!

Повышение концентрации мочевины

острая почечная недостаточность - в крови (до 500 мг/100 мл), и одновременно ↓↓↓ мочевина в моче!

Снижение концентрации мочевины:

Снижение синтетической функции печени (цирроз, отравления фосфором, мышьяком и другими ядами, поражающими паренхиму печени), одновременно снижается мочевина в моче.

Беременность, диета с низким содержанием белков.

Принцип метода

Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа красный комплекс.

Необходимые реактивы

1. Трихлоруксусная кислота, 100 г/л.

2. Диацетилмонооксим, 25 г/л водный раствор. Реактив стабилен.

3. Тиосемикарбазид, 2,5 г/л водный раствор. Для приготовления реактива можно пользоваться также тиосемикарбазида гидрохлоридом; последний применяется в виде 3,2 г/л водного раствора. Оба реактива стабильны при хранении в темной посуде при комнатной температуре.

4. Серная кислота концентрированная.

5. Ортофосфорная кислота 85%-ная.

6. Хлорное железо. Основной раствор хлорного железа: 5 г хлорного железа доводят до 100 мл водой и подкисляют добавлением 1 мл концентрированной серной кислоты. Из основного раствора готовят рабочий раствор хлорного железа: 1 мл основного раствора хлорного железа доводят до 100 мл водой, затем добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты.
Хранят в темной посуде. Годен в течение 2 недель.

7. Бензойная кислота, 2 г/л. 0,2 г кристаллической бензойной кислоты растворяют в 100 мл воды при интенсивном перемешивании на водяной бане.

8. Мочевина для приготовления калибровочного раствора. Готовят 7 ммоль/л раствор мочевины: 42 мг мочевины растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл. В качестве растворителя можно использовать 2 г/л раствор бензойной кислоты. Калибровочный раствор, приготовленный на растворе бензойной кислоты, стабильнее, чем водный; 1 мл калибровочного раствора содержит 0,007 ммоль мочевины.

9. Цветной реактив: к 30 мл рабочего раствора хлорного железа добавляют 20 мл воды, 1 мл 25 г/л раствора диацетилмонооксима и 0,25 мл 2,5 г/л раствора тиосемикарбазида. Цветной реактив готовят каждый раз перед употреблением.

Ход определения мочевины в сыворотке крови

Опытная проба: в центрифужную пробирку наливают 0,8 мл воды, 0,2 мл сыворотки и 1 мл 100 г/л раствора трихлоруксусной кислоты, смешивают.
Через 15-20 мин центрифугируют. В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного реактива. Пробирку выдерживают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, затем охлаждают в течение 2-3 мин под проточной водой. Измерение проводят на фотометре при длине волны 530-560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной слоя в 1 см. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо надосадочной жидкости берут 0,5 мл воды.

Расчет проводят по формуле путем сравнения с калибровочной пробой. Калибровочную пробу ставят аналогично опытной, но вместо сыворотки берут 0,2 мл калибровочного раствора.

Концентрация мочевины, ммоль/л:

Еоп / Ек ґ Ск,

Где Еоп - экстинкция опытной пробы;

Ск - концентрация мочевины в калибровочном растворе, 7 ммоль/л.
Определение мочевины в моче проводят аналогично определению мочевины в сыворотке крови, но вместо сыворотки берут 0,2 мл разведенной мочи.
Параллельно обрабатывают калибровочную пробу, как описано для определения мочевины в сыворотке крови.

Расчет мочевины на суточное количество мочи производят по следующей формуле:

Мсут = Ск ґ Еоп ґ а ґ К / Ек ґ б,

Где Мсут - количество мочевины в суточной моче, ммоль;

Еоп - экстинкция опытной пробы;

Ек - экстинкция калибровочной пробы;

А - суточное количество мочи, мл;

Б - количество мочи, взятое на анализ, мл;

К - коэффициент разведения мочи.

Примечания

1. Измерение проводят не позже чем через 15 мин после охлаждения проб ввиду неустойчивости окраски.

2. Из-за неустойчивости окрашенного комплекса мочевины с диацетилмонооксимом и зависимости окраски от условий нагревания калибровочную пробу определяют параллельно каждой серии опыта.

3.
При содержании мочевины в сыворотке крови выше 17 ммоль/л сыворотку разводят изотоническим раствором хлорида натрия, а результаты умножают на коэффициент разведения.

4. Для пересчета на азот мочевины результаты следует разделить на 2,14.

Используется для диагностики, определения прогноза и тяжести течения заболевания, а также для контроля за лечением.

Определение мочевины в клинико-диагностических лабораториях проводится различными методами, однако все их многообразие можно разделить на три основные группы:

Каждая из вышеперечисленных групп, в свою очередь, включает в себя разнообразные методы, объединяемые общим принципом, но отличающиеся друг от друга применяемыми реактивами, ходом исследования и т. д. При этом каждый метод имеет свои преимущества и недостатки и может предъявлять особые требования к сбору биологического материала для исследования.

Как правило, сейчас большинство лабораторий для определения мочевины использует готовые наборы различных фирм-производителей. В инструкциях к набору обычно указываются требования при сборе биологического материала, условия проведения исследования, влияющие факторы, а также референтные значения для данного метода. При переходе с одного набора (метода) для определения мочевины на другой, необходимо тщательно ознакомиться с инструкцией во избежание возможных ошибок на всех трех этапах лабораторного исследования.

Биологический материал, используемый для определения мочевины

Для определения мочевины используют кровь (сыворотку или плазму) и суточную мочу. Важное внимание должно уделяться правильному сбору и хранению образцов для исследования.

Мочевина в крови

Кровь для исследования берут утром натощак. При заборе крови для определения мочевины в ряде случаев нельзя использовать фторидные или аммиачные антикоагулянты, а также цитрат натрия (при использовании уреазных методов). Концентрация мочевины в сыворотке или плазме крови устойчива в течение 1 недели при хранении при 4 °C или не менее 6 месяцев при –20°C.

Нежелательно использовать гемолизированную, хилезную, липемическую или иктеричную сыворотку. Однако в ряде источников указывается, что на результаты исследований, проводимых в кинетическом варианте с большими разведениями образца, билирубин, гемоглобин или липемия, как правило, не влияют.

Мочевина в моче

Мочу для определения мочевины используют суточную, собирая ее соответственно основным правилам сбора суточной мочи . Хранить мочу до анализа следует при температуре 4–8 °C.

Использовать для анализа мутные образцы крайне нежелательно. Для устранения мутности образцы желательно отцентрифугировать при 1500-3000 об/мин. При мутности мочи , связанной с бактериальным загрязнением образца или денатурацией белковых компонентов вследствие нарушения условий хранения, от анализа следует отказаться.

Следует помнить, что концентрация мочевины в моче высокая, а потому образцы мочи необходимо разводить перед исследованием (обычно используется разведение в 20 - 50 раз), а после определения мочевины результат умножить на коэффициент разведения.

При оценке результатов исследования следует учитывать, что в ряде случаев на определение уровня мочевины в материале in vitro могут влиять некоторые лекарственные препараты, применяемые пациентом, что в свою очередь может приводить к ложному занижению или завышению результатов (химическое влияние).

Литература:

  • Слепышева В. В., Балябина М. Д., Козлов А. В. - Методы определения мочевины
  • Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под редакцией Меньшикова В. В. - Москва, "Медицина", 1987 г.

Мочевина – это конечный продукт обмена белков, а точнее азота аминокислот. Производится мочевина печенью во время белкового синтеза, удаляется почками совместно с мочой.

Остаток этого компонента в крови позволяет судить об эффективности работы почек, и любое отклонение от нормы концентрации мочевины должно настораживать.

Повышенная мочевина в анализе крови, как правило, говорит о хронических или острых болезнях почек. Очень часто на фоне заболеваний почек одновременно с увеличением концентрации мочевины в крови ее содержание в моче уменьшается (из-за плохого функционирования почек мочевина в крови начинает накапливаться).

Следует отметить тот факт, что мочевина и мочевая кислота – это разные вещества. Мочевая кислота, в основном, образуется благодаря распаду сложных нуклеиновых кислот.

Норма мочевины в крови

У взрослых уровень мочевины определяется методом биохимического анализа крови. Для этого кровь забирается из вены, расположенной на локтевом сгибе. Чтобы результаты были достоверны рекомендуется осуществлять сдачу крови утром и на пустой желудок (допускается только употребление воды).

Нормальный показатель содержания мочевины определяется в зависимости от возраста и пола человека.

  • новорожденные 1,7-5,0;
  • дети до 1 года 1,4-5,4;
  • дети до 15 лет 1,8-6,7;
  • взрослые женщины 2,0-6,7;
  • взрослые мужчины 2,8-8,0.

Количественный уровень в крови мочевины зависит от трех факторов:

  • показательный уровень аминокислот в организме обмена белков (от них зависит количество производимого аммиака);
  • состояние печени (зависит преобразование в мочевину аммиака);
  • состояние почек (вывод мочевину из организма).

Во время повышенного поступления в организм белковой пищи, и при значительном разрушении в организме белков, повышается образование аммиака, а значит, и мочевины.

Когда назначают этот анализ?

Этот показатель дает медикам представление о выделительной функции почек – их способности удалять ненужные вещества с мочой. По ее концентрации в крови можно говорить не только о работе почек, но и о состоянии мышечной системы и печени.

Показаниями для выполнения данного лабораторного теста являются:

  • все формы ишемической болезни сердца;
  • системные заболевания соединительной ткани;
  • (независимо от длительности ее существования);
  • выявление отклонений в общем анализе мочи при скрининговом исследовании;
  • болезни печени, сопровождающиеся нарушением ее функции ( , );
  • подозрение на воспалительные или инфекционные заболевания почек;
  • заболевания желудочно-кишечного тракта, которые характеризуются снижением абсорбции пищевых ингредиентов (целиакия).

Концентрация мочевины в крови означает:

  1. Показатель выделительной функции почек, то есть способность устранять совместно с мочой ненужные организму вещества.
  2. Показатель состояния мышечной ткани. Обусловлено это тем, что белок, в результате распада которого появляется мочевина, содержится по большей части в мышцах.
  3. Данные, указывающие на эффективность функций печени. Ведь мочевина вырабатывается из аммиака именно в этом органе.

Таким образом, мочевина в крови - весомый показатель состояния печени, почек и мышц.

Причины повышения мочевины в крови

Почему мочевина в крови повышена, и что это значит? На самом деле, существует огромное количество причин, из-за которых данный показатель может оказаться выше нормы. И не обязательно они будут связаны с какими-то отклонениями в жизнедеятельности организма.

Причины, не указывающие на болезнь , но по которым может быть повышенная мочевина в крови взрослого:

  1. В результате приема некоторых медикаментов, например, Лазикса, Эутирокса, Тетрациклина, Кортикостероидов, Сульфониламидов, цефалоспоринов, анаболиков, Неомицина, стероидов, салицилатов, андрогенов.
  2. Чрезмерного употребления белковой пищи или наоборот голодания.
  3. Из-за интенсивных физических нагрузок.
  4. Нервного стресса.

Одна из главных причин повышения содержания мочевины в крови связана с нарушением выделительной функции почек, которая может наблюдаться при ряде болезней :

  • Острая почечная недостаточность, при которой сначала повышается мочевина, а затем и составляет минимум 10 ммоль/л;
  • Закупорка мочевыводящих протоков конкрементами или новообразованием;
  • ХПН (параллельно определяют концентрацию мочевой кислоты, креатинина, цистатина C);
  • и гломерулонефрит;
  • Снижение кровоснабжения почек из-за обезвоживания, шока, сердечной недостаточности, инфаркта миокарда.

Также усиленный распад белка, а, соответственно, повышение биосинтеза мочевины (продукционная азотемия) вызывают многие заболевания человека :

  • Гематологические болезни (лейкозы, лейкемия, злокачественная форма анемии, гемолитическая желтуха).
  • Тяжелые инфекции, в том числе, кишечные (дизентерия, брюшной тиф, холера).
  • Заболевания кишечника (непроходимость, перитонит, тромбоз).
  • Ожоговая болезнь.
  • Новообразования предстательной железы.

Чтобы определить характер заболевания, медик рассматривает мочевину в сыворотке крови в динамике. При этом пациент дополнительно направляется на исследование мочи для определения показателя мочевины в этом материале. Для достоверного заключения во внимание принимают уровни эритроцитов, лимфоцитов, сахара в крови и другие показатели и симптомы, позволяющие оценить общее состояние здоровья пациента.

Симптомы

Повышенный уровень мочевины у мужчин и женщин в крови можно определить по следующим признакам:

  • боли внизу спины;
  • проблемы с оттоком мочи, ее выводится слишком много (полиурия) или очень мало (анурия);
  • повышение артериального давления;
  • отеки;

В медицине клинические признаки увеличения концентрации мочевины в крови называются специальным термином – уремический синдром.

Как лечить повышенный уровень мочевины в крови

Если биохимический анализ крови выявил у пациента данную патологию, врач, прежде всего, постарается выяснить, что именно явилось ее первопричиной, иными словами, нужно будет пройти дополнительное обследование, для того чтобы выявить основное заболевание. И конечно, нужно будет сдать повторный анализ крови.

В домашних условиях снижение уровня мочевины достигается путем уменьшения мясных продуктов из повседневного рациона, при этом, упор нужно сделать на фрукты, овощи, каши и ягоды. Рекомендуется пить отвар шиповника, соки, для приготовления которых используются свежие овощи и фрукты, мочегонный чай.

Но все это хорошо только в том случае, если у человека не обнаружено никаких серьезных заболеваний. В том же случае, если повышение мочевины в крови – это следствие болезни, то тогда решать проблему уровня мочевины будет врач. Причем, повышение данного показателя – это всего лишь реакция организма на возникшую проблему, это следствие.

Принцип метода основан на определении количества аммиака, высвобождаемющегося при разложении мочевины сыворотки или цельной крови под действием уреазы, колориметрическим методом с использование метода Несслера.

Диагностическое значение имеет повышение концентрации мочевины, которое встречается при хронических поражениях почек, усиленном распаде белков в тканях, непроходимости кишечника, закупорке мочевыводящих путей. Снижение уровня мочевины встречается при голодании, безбелковой диете, ферментных дефектах мочевинообразования.

Креатин и креатинин. Количественное определение креатинина, роль,

Диагностическое значение.

Креатин - азотсодержащая карбоновая кислота, которая встречается в организме позвоночных. Участвует в энергетическом обмене в мышечных и нервных клетках.

Креатини́н - конечный продукт креатин-фосфатной реакции. Креатинин образуется в мышцах и затем выделяется в кровь. Креатинин участвует в энергетическом обмене мышечной и других тканей. Из организма креатинин выводится почками с мочой, поэтому креатинин (его количество в крови) - важный показатель деятельности почек.

Принцип метода основан на способности креатинина реагировать в щелочной среде с пириновой кислотой с образованием окрашенных в оранжевый цвет продуктов. Интенсивность развивающегося окрашивания пропорциональна количеству креатинина.

Диагностическое значение: содержание креатинина в сыворотке крови резко возрастает при почечной недостаточности, застойной сердечной недостаточности, акромегалии, при избытке в пище белков животного происхождения.

39. Программированный контроль–3: знать формулы: ФАФС, УДФГК

(развернутые); химизм реакций обезвреживания аммиака в месте

образования, синтеза мочевины и креатинина, химизм образования

аммонийных солей, транспортных форм аммиака, обезвреживания

биогенных аминов.

ФАФС УНД УДФГК .

Механизмы обезвреживания на месте.

Синтез мочевины.

Синтези креатина .




Креатинина :